VetMIC CLIN GN
Art.nr. 395125
För resistensbestämning av Gram-negativa bakterier från
små sällskapsdjur, hästar och lantbrukets djur
Foto: Bengt Ekberg, SVA
VetMIC CLIN GN är en MIC-baserad (Minimal
Inhibitory Concentration) mikrotiterpanel för
resistensbestämning av Gram-negativa bakterier
som Escherichia coli, Klebsiella spp., Pseudomonas
spp. och Enterobacter spp.
Panelen är anpassad för kliniska frågeställningar
hos alla djur - såväl små sällskapsdjur som hästar
och lantbrukets djur. Två bakterieisolat testas på
en panel (96-håls mikrotiterplatta).
Medier
Standardmediet är katjonjusterad Müller Hinton
buljong (CAMHB).
När trimetoprim och sulfonamider ska testas
tillsätts 0,2 IU/ml tymidinfosforylas om inte
mediet har testats för tymidininnehåll.
Förberedande av inokulat
Förodlat inokulat
Ta material från 3-5 kolonier (< 7 dagars kultur)
med en plastögla och lös upp i 5 ml CAMHB.
Efter 3-5 timmars inkubering i 35-37 C uppnås
vanligen en koncentration av 108 CFU/ml.
besök. Ulls väg 2B post. 751 89 Uppsala
telefon. 018-67 40 00 e-post. vetmic@sva.se
webb. www.sva.se
Beroende på koncentrationen i förkulturen förs
omkring 10 µl över till 10 ml CAMHB för att få
en slutkoncentration som är ca 5 x 105 CFU/ml.
Direktspädning
En 1 µl ögla fylls med material från minst 3-5
kolonier (< 48 timmars kultur) som sedan löses
upp i 4 ml steril 0,9 % NaCl eller buljong för att
få cirka 108 CFU/ml. Från den här spädningen
förs omkring 20 µl över till 10 ml CAMHB för
att få en slutkoncentration som är ca 5 x 105
CFU/ml.
Inokulatets täthet ska kontrolleras regelbundet
genom bakterieräkning. Ett enkelt sätt är att ta
10 µl av inokulatet och späda i 10 ml 0,9 %
NaCl. Från denna spädning tas 100 µl och sprids
på en agarplatta. Efter inkubering ska 50 CFU
växa på plattan.
För vissa bakteriearter blir det ingen
pellet utan växten syns bara som en grumling.
Se först efter att det är fullgod växt i kontrollbrunnarna. Om det inte växer alls i buffertkontrollen betyder det att isolatet kan vara
känsligt för bufferten som används för att lösa
ampicillin och amoxicillin/ klavulansyra.
Om så är fallet går det inte att avläsa MIC för
dessa antibiotika. Gör om testet
med 100 µl per brunn för att späda ut
bufferten.
Inokulering och inkubering
Varje brunn fylls med 50 µl inokulat.
Plattan täcks med genomskinlig tejp och
inkuberas 16-18 timmar i 35-37 C. Ställ aldrig
mer än fyra plattor på hög. Efter inokulering
sprids 10 µl av inokulatet på en agarplatta för
renhetskontroll.
Kvalitetskontroll
Laboratorier som regelbundet gör resistensbestämningar ska inkludera kontrollorganismer
minst varje vecka och för varje ny batch av
buljong. Om metoden inte används regelbundet
ska varje omgång inkludera kontrollorganismer.
Lämpliga kontrollstammar för VetMIC CLIN
GN är: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia
Coli ATCC 35218 och Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853.
MIC läses som den lägsta koncentrationen som
hämmar synlig växt eller för sulfonamider den
lägsta koncentrationen som hämmar 80 % av
växten.
Förvaring och hållbarhet
Panelerna förvaras i rumstemperatur.
Hållbarheten är minst tre år. Öppnad
förpackning återförslutes och används inom två
veckor.
Avläsning
Panelen läggs på ett rack med en förstorande
spegel undertill. En skrivbordslampa som ger
indirekt ljus i ett annars mörkt rum underlättar
avläsningen. Växt av bakterier är lätt att se i
spegeln som en pellet på botten av brunnen.
Panel design VetMIC CLIN GN Art. nr. E395125
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
A
Am
16
Ctx
2
A/C
32/16
Cs
8
Ni
64
T/S
4/76
Gm
16
Sm
64
Nm
32
Tc
16
Ef
1
bk
B
8
1
16/8
4
32
2/38
8
32
16
8
0,5
dk
C
4
0,5
8/4
2
16
1/19
4
16
8
4
0,25
Ef
4
D
2
0,25
4/2
1
8
0,5/9,5
2
8
4
2
0,12
2
E
Am
16
Ctx
2
A/C
32/16
Cs
8
Ni
64
T/S
4/76
Gm
16
Sm
64
Nm
32
Tc
16
Ef
1
bk
F
8
1
16/8
4
32
2/38
8
32
16
8
0,5
dk
G
4
0.5
8/4
2
16
1/19
4
16
8
4
0,25
Ef
4
H
2
0.25
4/2
1
8
0,5/9,5
2
8
4
2
0,12
2
Am, Ampicillin; Ctx, Cefotaxime; A/C, Amoxicillin/Klavulansyra; Cs, Colistin; Ni, Nitrofurantoin;
T/S, Trimetoprim/Sulfametoxazol; Gm, Gentamicin; Sm, Streptomycin; Nm, Neomycin; Tc, Tetracyklin;
Ef, Enrofloxacin dk, kontroll med destillerat vatten; bk, kontroll med buffert (se text)
